藻類(lèi)培養(yǎng)基可由濃縮溶液或粉末鹽混合物制備而成。濃縮溶液組分較完整，包含維生素，應(yīng)冷凍保存。而粉末培養(yǎng)基則可以靈活地自定義培養(yǎng)基的最終組分。這類(lèi)用于制備水生物種生長(zhǎng)培養(yǎng)基的粉末由“富集”鹽混合物和完全合成培養(yǎng)基的鹽混合物組成。將粉末或濃縮溶液分別加入淡水或海水中以制備富含淡水或海水的培養(yǎng)基。為了制備合成海生生長(zhǎng)培養(yǎng)基，將粉末添加到組織培養(yǎng)級(jí)淡水中。已公布的水生物種生長(zhǎng)培養(yǎng)基配方通常含有碳酸氫鈉。我們的粉末混合物中不包含碳酸氫鈉，應(yīng)視需要添加在培養(yǎng)基中。

從包裝粉末制備

粉末培養(yǎng)基極易吸濕，必須防止空氣中的水分對(duì)其潮解。單個(gè)包裝的全部粉末應(yīng)盡可能在打開(kāi)后立即使用。不建議以濃縮形式制備培養(yǎng)基，否則一些鹽復(fù)合物可能會(huì)沉淀。添加到培養(yǎng)基中的補(bǔ)充劑可能會(huì)影響其保質(zhì)期和儲(chǔ)存條件。制備培養(yǎng)基的基本步驟如下：

1、量取終體積約90%的淡水或海水量，例如：終體積為10 L則量取9L。選擇一個(gè)容量是終體積兩倍的容器。

2、在攪拌水的同時(shí)加入粉末狀培養(yǎng)基并攪拌直至完全溶解。某些情況下可能需要加熱將粉末溶解。

3、用少量水沖洗粉末原包裝，以去除痕量的粉末。添加到步驟2的溶液中。

4、根據(jù)需要，加入碳酸氫鈉(NaHCO₃)或其他緩沖液；攪拌至溶解。添加所需的熱穩(wěn)定補(bǔ)充劑(例如蔗糖、瓊脂、維生素、生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素等)

5、加入更多的水使培養(yǎng)基達(dá)到終體積。

6、根據(jù)需要，使用NaOH、HCl或KOH將培養(yǎng)基調(diào)節(jié)至所需pH。

7、如果加入膠凝試劑，則加熱直至溶液澄清。

8、根據(jù)需要，在高壓滅菌之前(或之后)將培養(yǎng)基加樣到培養(yǎng)皿中。高壓滅菌后加入熱不穩(wěn)定的組分。

9、液體培養(yǎng)基可使用0.22 μM過(guò)濾器過(guò)濾滅菌，或在有效的高壓滅菌器中以1 kg/ cm²(15 psi)、121℃滅菌，滅菌時(shí)間按照培養(yǎng)基滅菌方案中所述。

10、待培養(yǎng)基冷卻后使用。

粉末狀培養(yǎng)基和堿性鹽混合物僅供實(shí)驗(yàn)室使用。不適用于醫(yī)用、家用或其他用途。

自備材料

1、海水，經(jīng)植物細(xì)胞培養(yǎng)檢驗(yàn)(貨號(hào)S9148)

2、去離子組織培養(yǎng)級(jí)水(貨號(hào)W3500)

3、1 N鹽酸(HCl)

4、1 N氫氧化鈉(NaOH)

5、碳酸氫鈉，經(jīng)植物細(xì)胞培養(yǎng)檢驗(yàn)(貨號(hào)S5761)

生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、碳水化合物、膠凝劑和其他補(bǔ)充劑見(jiàn)組分表。

儲(chǔ)存方法

將干燥培養(yǎng)基儲(chǔ)存于0-5℃的干燥器中。粉末培養(yǎng)基變質(zhì)可以通過(guò)以下方式識(shí)別：

1)顏色變化；

2)粉末中的造粒、結(jié)塊或顆粒物；

3)pH變化；或4)正確使用時(shí)無(wú)法促進(jìn)生長(zhǎng)。

培養(yǎng)基中的沉淀

植物組織培養(yǎng)基中隨著時(shí)間推移會(huì)產(chǎn)生沉淀。已經(jīng)分析了沉淀物(未發(fā)表內(nèi)部數(shù)據(jù)；Dalton等，1983)，它們由微小的淺黃白色顆粒組成。沉淀物的分析表明其主要含鐵、磷酸鹽和鋅。導(dǎo)致沉淀物產(chǎn)生的可能原因是亞鐵離子不可避免地氧化成三價(jià)鐵離子以及未螯合的鐵離子的存在。當(dāng)磷酸鐵的含量超過(guò)其溶解度時(shí)，也會(huì)發(fā)生沉淀。尚未有報(bào)道表明沉淀物會(huì)對(duì)植物組織培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和發(fā)育產(chǎn)生有害影響。

培養(yǎng)基組分表